近日，中国农业科学院上海兽医研究所伴侣动物生物安全风险预警及防控技术团队构建了基于荧光微球的免疫层析试纸条（FM‑ICTS），用于猫杯状病毒（FCV）VP1结合抗体快速检测。该方法在层析反应20 min后即可通过荧光分析仪读取结果，为FCV抗体水平的快速评估提供了补充性检测工具。相关研究成果发表于《Microchemical Journal》。
猫杯状病毒（FCV）是引发猫上呼吸道感染与口腔溃疡的重要病原，部分毒株还可诱发重症全身性疾病。FCV 遗传与抗原多样性较高，不同毒株诱导机体产生的抗体应答及交叉中和能力存在差异，给血清抗体检测结果的解读带来困难。病毒中和试验虽可评估血清针对特定毒株的功能性中和能力，但该方法依赖活病毒与细胞培养，检测周期长达数日，无法满足大批量样本快速筛查的需求。因此，研发操作简便、可快速定量抗体应答水平的检测方法，对FCV血清学研究以及体内抗体动态监测具有重要应用价值。
本研究建立了以rVP1‑Fc荧光微球为探针的FCV抗体快速定量检测方法（FM‑ICTS）。试纸条T线包被rVP1捕获免疫复合物，C线包被SPA结合未反应的荧光探针；检测仅需5 μL血清样本，层析20 min后，通过T/C荧光比值实现抗体水平定量。经条件优化，该方法重复性良好，批内、批间变异系数（CV）均＜8%；特异性良好，与常见猫病原无交叉反应，且具备较好热稳定性，储存30 d仍可维持有效检测信号，校准曲线四参数拟合效果良好（R²=0.9851）。临床血清样本验证结果表明，试纸荧光比值与F9毒株中和效价呈显著中度正相关（r=0.5719, P<0.0001）；平行中和试验同时证实，血清对异源毒株（F9与SH14）的中和效价存在明显毒株特异性差异。研究基于定量检测曲线初步建立S0—S4抗体应答分层体系，可用于FCV抗体水平快速评估与动态监测；后续仍需扩大样本量，并增加多毒株中和试验验证，进一步明确该检测指标与临床保护力之间的对应关系。
图1 FM-ICTS检测FCV特异性抗体的流程示意图
中国农业科学院上海兽医研究所博士研究生李娜和博士研究生朱雯琪为共同第一作者，上海兽医研究所孟春春研究员和刘光清研究员为共同通讯作者。该研究获得国家重点研发计划、中央级公益性科研院所基本科研业务、上海市科学技术委员会及上海市农业农村委员会科技创新项目的支持。
